ДНК-диагностика: ПЦР-анализ

ДНК диагностика ПЦР анализы на инфекции. Что такое ПЦР-анализы. Достоинства метода. Как правильно подготовиться к ПЦР-анализу. Бактериальные инфекции. Вирусные инфекции. Диагностика инфекций.

ДНК-диагностика — это один из наиболее современных высокотехнологичных методов исследования, который широко применяется в диагностике инфекционных заболеваний, позволяя обнаруживать даже единичные микроорганизмы в организме человека. В современной клинической практике ДНК-диагностика объединяет несколько методов исследования, самым распространенным из которых является метод ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Первоначально сам принцип метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) был разработан Кэрри Мюллисом в 1983 г. Открытие полимеразной цепной реакции стало одним из наиболее выдающихся событий в области молекулярной биологии в последней четверти XX века, и за разработку ПЦР-анализа Кэрри Мюллис уже в 1993 г. был удостоен Нобелевской премии в области химии.

Анализ методом ПЦР основан на обнаружении в материале исследования небольшого фрагмента ДНК возбудителя той инфекции, которую подозревает врач. Говоря «небольшой фрагмент ДНК», мы подразумеваем «обрывок» нуклеиновой цепочки длиной всего в несколько сотен пар нуклеотидов — тогда как любая, самая простая ДНК включает в себя не менее нескольких тысяч оснований.

Такой подход является наиболее эффективным при диагностике внутриклеточных паразитов и медленнорастущих микроорганизмов, требующих сложных условий культивирования для ранее использовавшихся способов диагностики.

Благодаря высокой точности определения появилась возможность поиска возбудителей болезней практически в любом биологическом материале.

Сегодня методу ПЦР-анализа подвергаются:

  • соскоб эпителиальных клеток (соскоб из уретры у мужчин и у женщин, соскоб из цервикального канала);
  • кровь, плазма, сыворотка крови;
  • биологические жидкости (сок простаты, плевральная, спинномозговая, около-плодная, суставная жидкости, слюна);
  • моча; 
  • мокрота;
  • биопаты желудка и двенадцатиперстной кишки;
  • слизь и другие биологические выделения.

Достоинства метода ПЦР-анализ

Высокая специфичность за счет того, что искомые кусочки генетического материала имеют уникальные последовательности ДНК.

Высокая чувствительность за счет многократного размножения исходного материала.

Универсальность — при правильном подходе может быть проанализирован любой материал.

Быстрое получение результата (в отличие от бактериологических методов, где результата приходится ждать довольно долго).

Возможность одновременной диагностики многих возбудителей (анаэробов и аэробов; вирусов, бактерий и грибов).

Для некоторых микроорганизмов ПЦР является практически единственным методом диагностики (например, для Mycoplasma genitalium).

ПЦР-анализ может быть качественный и количественный, т.е. может просто свидетельствовать о наличии того или иного возбудителя, а может и давать информацию о количественном содержании возбудителя в тех или иных биологических материалах.

Как правильно подготовиться к ПЦР-анализу

Достоверность результатов лабораторной диагностики ПЦР зависит не только от опыта и профессионализма врача-лаборанта, возможностей данной лаборатории, но и от того, соблюдал ли пациент рекомендации врача, насколько правильной была его подготовка к проведению анализа.

При сдаче анализа методом ПЦР врачи рекомендуют соблюдать следующие правила:

  • за сутки до проведения анализа не жить половой жизнью:
  • сдача ПЦР-анализа крови проводится натощак, т. е. необходимо ничего не есть, не пить и не жевать жвачку;
  • для ПЦР-анализа мочи используется первая утренняя порция, собранная в чистый, стерильный контейнер.

ПЦР-анализы

В устоявшейся клинической практике ПЦР-анализы обычно сдают «блоками » на определенные группы возбудителей.

Например:

ПЦР-диагностика инфекций, передаваемых половым путем, где одновременно выявляются

Бактериальные инфекции

Chlamydia trachomatis (хламидия). Mycoplasma hominis (микоплазма человека), Gardnerella vaginalis (гарднерелла), Mycoplasma genitalium (микоплазма генитальная), Ureaplasma pannun (уреаплазма парвум), Ureaplasma urealyticum (уреаплазма уреалитикум). Neisseria gonorrhoeae (гонококки);

Вирусные инфекции

HPV (Human Papillomavirus, папилломавирус человека) типы 16, 31, 33, 35Н, 52, 58, 67; типы 18, 45, 39, 59; тип 6, 11; тип 26, 51;

Инфекции, вызванные простейшими

Trichomonas vaginalis — трихомонады; 

Грибковые инфекции

Candida albicans — кандида.

ПЦР-диагностика бактериальных инфекций

Бруцеллы

Brucella species вызывает заболевания дыхательных путей, мочевыделительной системы, органов половой сферы и опорно-двигательного аппарата:

Гемофилы

К настоящему времени известно 9 видов гемофил, вызывающих инфекции у человека.

Haemophilus ducrei вызывает инфекции, передающиеся половым путем (симптомы — обильные водянистые, периодически гноевидные выделения с неприятным запахом из половых путей, дизурические явления).

Haemophilus speciec вызывает заболевания дыхательных путей (симптомы — поражение дыхательных путей: кашель с мокротой: повышение температуры тела: слабость, недомогание):

Кампилобактерии

Campulobacter species вызывает воспалительные заболевания половых органов у женщин и мужчин со следующими симптомами:

  • дизурические явления (небольшие рези при мочеиспускании): слизисто-гнойные выделения из половых путей;
  • тянущие боли внизу живота.

Листерии

Listeria monocytogenes вызывает заболевания отделов малого таза, мочевыводящих путей, суставов, органов дыхания со следующими симптомами:

  • слизистогнойные выделения из половых путей;
  • боли внизу живота;
  • отек суставов, боли в суставах;
  • кашель с мокротой;
  • дизурические явления;

Микобактерии туберкулеза

Развитие туберкулезной инфекции вызывают вида микобактерий: Mycobacterium tuberculosis; Mycobacterium bovis: Mycobacterium africanum; Mycobacterium microti. Однако в патогенезе туберкулеза у человека ведущая роль принадлежит именно Mycobacterium tuberculosis. Во всем мире каждый год регистрируют около 8 миллионов новых случаев этого тяжелого заболевания, около 3 миллионов человек ежегодно умирает от туберкулеза. 

Микоплазмы

Внутриклеточные микробы, очень широко распространены в природе. Уреаплазмы — это особая и наиболее «популярная» разновидность патогенных для человека микоплазм. На их долю приходится большая часть хронических микоплазмозов человека. Кроме уреаплазм известно еще несколько видов безусловно патогенных для человека видов: Mycoplasma species. Mycoplasma pneumonia. Mycoplasma hominis. Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealyticurn, Ureaplasmaparvum.

Наиболее часто патогенными видами микоплазм поражаются

  • мочеполовые органы: пиелонефрит, уретрит, нарушение овуляции и сперматогенеза;
  • сердечно-сосудистая система: артериальная гипотензия (гипотония), кардит, перикардит;
  • органы пищеварения: невирусный гепатит, гастрит, холецистит, кишечные дисфункции (упорные диареи);
  • респираторные органы: ОРЗ, хронический ринит, атипичная пневмония (не путать с азиатской «атипической пневмонией»); 
  • суставы: ревматоидный артрит, подагра;
  • центральная и периферическая нервная система: неврастении, невралгии, локальные болевые синдромы и, по некоторым данным, демиелинизирующие заболевания;
  • кожа и слизистые оболочки: повышенная ломкость и проницаемость капилляров, вульгарные угри, простой герпес (микоплазмы принимают участие в транспорте вируса);

Нейссерии

Для человека патогенными являются Neisseria gonorrhoeae и Neisseria meningitides, также у человека выделяют непатогенные виды N. sicca, N. mucosa. N. perflava. Neisseria gonorrhoeae является возбудителем специфического венерического заболевания — гонореи:

Стрептококки

большинство стрептококков входят в состав нормальной микрофлоры дыхательных, мочевых, половых путей и ЖКТ, но некоторые их виды имеют важное значение как возбудители болезней человека:

  • стрептококки группы А (Streptococcus pyogenes) вызывают ангину — одну из самых распространенных среди детей школьного возраста инфекций, а также широко известные постинфекционные заболевания — ревматизм и острый гломерулонефрит;
  • стрептококки группы В (Streptococcus agalactiae) — основные возбудители сепсиса и менингита у новорожденных, послеродового сепсиса и эндометрита;

Трепонема

Treponema pallidum — возбудитель сифилиса;

Хеликобактер пилори

Установлена четкая связь Helicobacter pylori с развитием гастрита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, рака желудка и многих других заболеваний.

ПЦР-диагностика вирусных гепатитов, герпеса и других вирусных инфекций

Вирус Эпштейн-Барр

Из семейства герпесвирусов, вызывает легкое заболевание у детей и инфекционный мононуклеоз у неиммунизированных подростков и взрослых, является вездесущей вирусной инфекцией и присутствует практически у 100% популяции людей. Чаще всего заражение 

им происходит в раннем детском и в юношеском возрасте, поэтому более 90% взрослых уже перенесли эту инфекцию в той или иной форме и имеют антитела к вирусу Эпштейн-Барр:

Герпес

Самая распространенная вирусная инфекция. Около 90% людей на земле инфицированы герпесом. Только у 5% инфицированных проявляются симптомы болезни, у остальных она протекает без клинических проявлений. Наиболее часто вирус поражает: глаза (конъюнктивит, кератит), слизистую губ, слизистые оболочки половых органов, центральную нервную систему (энцефалит, менингит). У беременных женщин вирус может вызвать патологию беременности, самопроизвольные аборты, преждевременные роды;

Вирусные гепатиты

Это гепатиты, вызванные вирусной инфекцией: А, В, С. G:

Цитомегаловирус

Это целая группа вирусов, которые могут присутствовать в любой жидкости организма человека (кровь, моча, слюна, сперма, секрет влагалища, грудное молоко и т.д.). Цитомегаловирус во многом схож с вирусом простого герпеса, поэтому его относят к разновидности герпетических инфекций. Цитомегаловирус как болезнь может развиться в результате ослабления защитных реакций организма: на фоне сильных стрессов, гриппа, обострения хронических заболеваний, осложнений беременности;

другие вирусные инфекции: ВИЧ, вирус Варицелла-Зостер, энтеровирус.

ПЦР-диагностика острых кишечных и респираторных инфекций

Респираторные инфекции

Аденовирусы, грипп А и В, на РНК вируса гриппа A, A/H1N1/CA/2009 (анализ на свиной грипп);

Вирусные кишечные инфекции

Астровирус, норовирусы 1-го и 2-го типов, ротавирусы А и С, саповирус;

Бактериальные кишечные инфекции

E. Coli (энтеротоксигенные штаммы), Shigella (геморрагические штаммы), Salmonella typhi, Salmonella species. Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis.

Будьте здоровы!

Добавить комментарий

Следующая новость

Анализ крови на витамины и неорганические вещества

Вт Окт 13 , 2020
Анализы на витамины и микроэлементы. Витамин В12, витамин D, железо, калий, кальций, натрий, хлор, магний, фосфор, фолиевая кислота. Показания к назначению анализа. Причины изменения нормальных показателей. Норма показателей.
Анализ крови на витамины и микроэлементы что показывает и норма

Календарь новостей

Январь 2021
Пн Вт Ср Чт Пт Сб Вс
 123
45678910
11121314151617
18192021222324
25262728293031

Архивы новостей